尊龙凯时-人生就是博提供的Matrigel基质在色差方面会有变化(从淡黄色到深红色),这是因酚红和碳酸氢盐与二氧化碳反应所致。然而,当与5% CO2平衡后,这种色差会显著减少。经过冻融步骤后,请轻轻摇晃试剂瓶,以确保Matrigel均匀分散。所有操作应在无菌环境下进行,试剂瓶的瓶盖可用70%乙醇擦拭后自然干燥。此外,为了保持Matrigel的匀浆状态,建议使用预冷的移液器。
Matrigel基质可用于细胞培养,细胞可以在0.5mm厚的Matrigel层表面生长,或在1mm厚的三维Matrigel基质中生长。需要注意的是,过度稀释的Matrigel会形成非胶质的蛋白层,适合用于细胞附着,但不适合细胞分化的研究。冻融后的Matrigel可分装在多个预冷的小管中,迅速冷冻并保存,以避免多次冻融的影响。
Matrigel在22-35℃的环境下迅速成胶,因此在溶解时应在4℃冰上过夜冻融(在4℃时,随着温度升高部分会成胶)。在使用之前,所有操作用品需置于冰浴中,并必须使用预冷的移液管、吸头及小管来处理Matrigel。成胶后的Matrigel可在42-48小时后重新转为液态。
包被与成胶方法
为了确保Matrigel基质膜的成胶性能与稳定性,稀释浓度不应低于1:3,可以使用无血清培养基进行稀释,Matrigel成胶后应立即使用。
薄胶成胶方法
1. 冻融后,使用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀成匀浆状。
2. 将需要使用的培养板放置于冰上,加入浓度为50μL/cm2生长面积的Matrigel基质。
3. 在37℃下放置30分钟即可使用。
厚胶成胶方法
1. 冻融后,使用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀成匀浆状。
2. 将需要使用的培养板置于冰浴中,将培养的细胞与Matrigel基质混合,并使用移液枪头使其均匀悬浮于基质中,加入浓度为150-200μL/cm2生长面积的Matrigel基质。
3. 在37℃下放置30分钟后可完成成胶。此方法可使细胞直接在胶表面生长,也可将细胞混合于基质中培养。
薄层包被方法
1. 冻融后,使用预冷的移液枪头将Matrigel基质混匀成匀浆状。
2. 根据使用需求,采用无血清培养基稀释Matrigel基质,并确定最佳包被浓度。
3. 将稀释的Matrigel基质包被于所需的培养器皿中,确保包被量至少覆盖整个器皿的生长表面。最后,在室温下孵育1小时。
无论是Matrigel的稀释、成胶还是细胞培养,尊龙凯时-人生就是博始终与您同行,助您在生物医疗领域取得更多成功。