人骨肉瘤细胞MG63培养说明书

一、细胞培养条件

细胞名称：人骨肉瘤细胞MG63

生长特性：贴壁生长

冻存条件：无血清冻存液

培养体系：MEM + 10% FBS + 1% P

传代方法：第一次建议1:2传代；换液每2天进行。

备注：请使用无菌离心管收集培养基，以作为对比培养。如对比培养效果不理想，建议直接采购我们的完全培养基。

二、细胞处理及培养方法

收到细胞后，请在培养至良好状态后灌满完全培养液并封好瓶口，确保运输细胞的最佳状态。使用75%酒精喷洒清洁细胞瓶，之后将其置于超净台内进行无菌操作。将细胞瓶放置在37℃、5% CO2的培养箱中静置3-4小时，以稳定细胞状态后再进行后续处理。通过显微镜观察株系生长状态，并拍摄不同倍数的照片进行保存（最好拍摄40x、100x和200x各一张）。前三天的照片是重要的售后依据，未提供照片则默认为收到状态良好。

细胞传代步骤

a. 如果细胞的汇合度未超过80%，请收集超过5ml的完全培养液到离心管中，随后放入37℃、5% CO2的培养箱中培养；如果汇合度超过80%，即可进行传代。

1. 弃去培养上清液，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。
2. 向培养瓶中添加0.25%胰蛋白酶消化液约1-2ml，置于37℃的培养箱中消化1-2分钟，观察细胞消化状态。
3. 如果细胞大部分变圆且脱落，请轻轻敲打培养瓶，随后加入超过5ml的完全培养基以终止消化。
4. 轻轻吹打细胞以确保完全脱落，然后吸出细胞悬液，转移至15ml的离心管中，在1000 RPM条件下离心5分钟，弃去上清液，加入1-2ml的完全培养基进行重悬。
5. 将细胞悬液按1:2比例进行分瓶传代（两个T25瓶），补充新的完全培养基至5-8ml/瓶，最后放入到37℃、5% CO2的培养箱中培养。

细胞冻存步骤

b. 当细胞生长覆盖0.8的培养瓶面积时，弃去培养液并用PBS清洗细胞一次；

1. 添加0.25%胰蛋白酶消化液约1ml，观察细胞回缩状态，并加入5ml完全培养液以终止消化。
2. 将悬液转移至15ml离心管中，采用1000 RPM离心5分钟。
3. 弃去上清，加入1ml雅吉生物无血清冻存液（货号：C7001），混合均匀后装入冻存管中。
4. 将冻存细胞直接放入-80℃冰箱保存。如需转入液氮罐，需在-80℃冰箱中存放24小时以上后再移入液氮罐。

细胞复苏步骤

c. 从液氮中取出细胞冻存管（请佩戴防护面具），迅速将其置于37℃水浴中解冻，直到完全没有结晶，再用75%的酒精擦拭外壁；

1. 将冻存管中的细胞转移至含有5ml完全培养基的15ml离心管中，采用1000 RPM离心5分钟。
2. 弃去上清，加入5ml完全培养基进行重悬。而后，将细胞接种到T25培养瓶中，最后放入37℃、5% CO2的细胞培养箱中培养。
3. 第二天，换用新鲜的完全培养基继续培养。

四、注意事项

细胞在运输过程中可能会出现脱落的现象，属正常现象。如脱落较多，可以将培养瓶中的所有培养液收集至离心管，进行1000 RPM离心5分钟以收集上清。随后使用胰酶消化处理，以重新悬浮细胞，最后按1:2比例进行分瓶传代与培养。

五、售后条款

如有细胞问题，针对不同情况进行重发或不重发的情况将由具体标准决定。凡在适当时间内提供真实的实验数据与证明，我们将竭诚为您服务，确保您顺利使用细胞资源。在这些过程中，请务必使用我们尊龙凯时-人生就是博品牌的相关产品，以确保最佳的实验效果。